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液相色谱仪永利电玩城中 254nm 波长的认识误区

编辑:永利电玩城????来源:未知????发布时间:2019-05-09 14:22????浏览量:
在 JJG705-2014《液相色谱仪永利电玩城检定规程》中,针对紫外检测器或二极管阵列检测器,均采用254nm 波长来检验仪器的噪声、漂移、检出限和重复性等计量性能指标。至于为什么采用 254nm 作为检测波长,很多计量工编辑都会认为是基于检出限和重复性实验中所用的萘 / 甲醇溶液的吸取波长是254nm。因为根据液相色谱仪的分析原则,一般采用被测样品的吸取峰作为检测波长,以得到最佳的检测效果。但是,萘 / 甲醇溶液的吸取光谱扫描结果表明,萘 / 甲醇溶液的最大吸取峰在 220nm,其次在 275nm 附近有几个弱的吸取峰(见图1,其中图右上方是对 275nm 附近峰的放大图),而在 254nm处并没有吸取峰,且在该处的吸光度并不强,大约为最大吸取峰处(220nm)吸光度的 4%。
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从图1 大家可以得到,220nm 处和 275nm 处的吸光度分别是254nm 处吸光度的25倍和1.5倍左右。大家以岛津的液相色谱仪为例(泵型号为 LC-20AT,二极管阵列检测器型号为 SPD-M20A),以甲醇为流动相,流速 1ml/min,检测波长设为 220nm、254nm、275nm 和 300nm,分别检测高浓度 (1×10 -4 g/ml) 和低浓度 (1×10 -7 g/ml) 的萘 / 甲醇溶液,检测结果如表 1所示。为了更好比较检测波长对检测结果的影响,大家以 254nm 的检测结果为基础,分别算出其他波长检测结果与其峰面积比和峰高比,如表 2 所示。
 
从表 1和表 2 可以看出:
(1)220nm 和 275nm 处检测得到的峰高、峰面积明显优于 254nm 检测得到的结果,表明 254nm并不是萘 / 甲醇的最佳检测波长。
(2)275nm 与 254nm 的峰面积比和峰高比,无论是在高浓度还是低浓度的萘 / 甲醇中都基本相等,且与吸取光谱计算结果基本一致。
(3)220nm 与 254nm 的峰面积比和峰高比,只在低浓度的萘 / 甲醇中相等,且与吸取光谱计算结果基本一致;在高浓度的萘 /甲醇中,两者不仅不相等,而且比光谱计算结果小很多。
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以上结果表明,在吸光度不强的情况下,液相色谱仪在不同波长检测得到的峰面积比和峰高比基本相同,且与被测物的吸取光谱在不同波长得到的吸光度比值基本一致。在220nm 处检测结果的差异,是由于高浓度萘 / 甲醇在该波长下吸光度太强,已经偏离了朗伯 -比尔定律。因为实验所用的流动甲醇的最大吸取波长在183nm 左右,对检测波长大于 200nm 的测量基本没有影响,所以可以认为不同波长下仪器的基线噪声基本一致。但是,由于检测波长对萘 / 甲醇的峰高影响显著,所以最终将影响仪器的检出限。从表 2 可以推算出,220nm 处仪器的检出限将比 254nm 处(规程方法)提高一个数量级以上。既然萘 / 甲醇的吸取峰不在 254nm,且在该处的吸光度(或检测限)在较宽的检测波长范围内(200nm~290nm) 属于偏低水平,那为什么 JJG705-2014 还会选择 254nm 作为检测波长呢?有人认为,这是因为生物制剂、蛋白等一般都在 254nm处有吸取,所以选择 254nm。这种说法有一定道理,但不是根本原因。
 
只能说选择 254nm 作为检测波长是有历史原因的,因为在多波长紫外检测器和二极管阵列检测器应用之前,出现过单波长紫外检测器,其光源采用低压汞灯,发出固定波长为 254nm(或 280nm)的紫外光。参照 JJG178-2018《紫外、可见、近红外分光光度计永利电玩城检定规程》附录 A,低压汞灯 253.65nm处谱线强度最大,所以针对这类仪器,254nm 是不二的选择。虽然这类单波长紫外检测器现在已经很少见了,但是 254nm 却作为检测波长遗留了下来。
 
本文从液相色谱仪的发展历史出发,指出单波长紫外检测器所用低压汞灯的 254nm 处的谱线是JJG705-2014 中采用 254nm 作为紫外检测器(或二极管阵列)检测波长的根本原因。由于萘 / 甲醇的吸取峰并不在 254nm,且在该处的吸光度约为最大吸光度的 4% 左右,所以利用该波长检测得到的仪器检出限并不是萘 / 甲醇的最佳检出限,而且不同物质的吸取峰和吸光系数差别较大,其检出限也就差别较大。所以,JJG705-2014 给出的检出限指标,只是作为一种仪器计量指标,对于仪器使用者来说,参考意义不大。

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